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Ki67 蛋白是細(xì)胞周期相關(guān)的一種核蛋白，主要表達(dá)于細(xì)胞增殖分裂的各個(gè)時(shí)期（G1、S、G2 和M 期），但是在靜息的細(xì)胞（G0 期）中不表達(dá)。Ki67 常用于檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)指數(shù)（免疫組化法利用計(jì)算細(xì)胞總數(shù)中的Ki67 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例得到Ki67 指數(shù)）。

Ki67 通常通過(guò)標(biāo)記抗Ki67 的抗體（FITC 綠色熒光）和DNA 染料碘化丙啶（PI，紅色）而利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞周期的檢測(cè)。

操作方法

1. 在最適的環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞。

2. 除去培養(yǎng)液，用PBS 洗一次。

3. 胰蛋白酶處理和收集細(xì)胞，離心，（注意1）保證每管細(xì)胞數(shù)在106 個(gè)。

4. 用0.3 ml PBS 輕輕的重懸細(xì)胞, 然后慢慢加入0.7 ml 預(yù)冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混勻。在4°C 至少1h。（注意2）

5. 沉淀細(xì)胞，完全吸去上清。

6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗細(xì)胞2 次。

7. 用100μl 抗體孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重懸細(xì)胞，加入1ul Ki67 抗體(1μg/106 cells)，室溫孵育1 小時(shí)。

8. 離心收集細(xì)胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。

9. 離心收集細(xì)胞，用50μl 抗體孵育液重懸，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室溫孵育30 分鐘。離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。

10. 用含有終濃度為10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重懸細(xì)胞。

11. 避光使細(xì)胞在室溫下孵育20min 后，離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，轉(zhuǎn)移至流式檢測(cè)管中重懸。

12. FACS 檢測(cè)或者儲(chǔ)存于4℃。

Ki67細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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