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在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V 是一種分子量為35~36kD 的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V 被作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。將Annexin V 進行熒光素PE 標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin V 作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

7-AAD（7-amino-actinomycin D）是一種核酸染料，它不能通過正常質(zhì)膜，隨著細(xì)胞凋亡、細(xì)胞死亡過程，質(zhì)膜對7-AAD 的通透性逐漸增加，結(jié)合細(xì)胞凋亡中DNA 的有控降解，在合適波長激發(fā)光的激發(fā)下可發(fā)出明亮的紅色熒光，通過7-AAD 標(biāo)記DNA 的強弱，將細(xì)胞分為三群：7-AAD 強為死亡細(xì)胞，7-AAD 弱是凋亡細(xì)胞，7-AAD-為正常活力細(xì)胞。7-AAD 同PI 有著相似的熒光特性，但其發(fā)射波譜較PI 窄，對其他檢測通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI 的最佳替代品，可與Annexin V-PE 聯(lián)合使用。

本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞凋亡檢測（不推薦用于檢測組織樣本）。

注意事項

1. 微量試劑取用前請離心集液。

2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。

3. 7-AAD 為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿防護服、戴手套等。

4. 本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不推薦用于檢測組織樣本。

5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞，建議適用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當(dāng)，可能引起假陽性，而用細(xì)胞刮子會造成細(xì)胞粘連成團，而影響檢測。可將胰酶消化后細(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止進一步的損傷。

6. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請不要固定樣品。

7. 因檢測細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測儀器不同，因而流式檢測的熒光補償也不同，因此建議每次檢測均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對照，進行熒光補償?shù)恼{(diào)節(jié)。

Annexin V-PE/7-AAD雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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