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本試劑盒可應用于培養(yǎng)細胞凋亡檢測（不推薦用于檢測組織樣本）。在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V 是一種分子量為35~36kD 的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V 被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V 進行熒光素（EGFP、FITC）標記，以標記了的Annexin V 作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生。與FITC 的綠色熒光信號相比，EGFP 的綠色熒光信號具有信號強，不易淬滅，穩(wěn)定性高等優(yōu)點，故本試劑盒采用EGFP作為熒光標記探針。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI 能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V 與PI 匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開來。

注意事項

1. 微量試劑取用前請離心集液。

2. Annexin V-EGFP，Propidium Iodide（PI）避光保存及使用。

3. Propidium Iodide （PI）有毒，操作時請戴手套。

4. 本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數(shù)量不應低于1×105，不推薦用于檢測組織樣本。

5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細胞。如果是貼壁細胞，需用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當，可能引起假陽性，而用細胞刮子會造成細胞粘連成團，而影響檢測。可將胰酶消化后細胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止進一步的損傷。

6. 細胞固定后可能導致熒光的淬滅，請不要固定樣品。

7. 因檢測細胞的類型、凋亡誘導劑種類、使用的檢測儀器不同，因而流式檢測的熒光補償也不同，因此建議每次檢測均需使用未經(jīng)凋亡誘導處理的細胞作為對照，進行熒光補償?shù)恼{(diào)節(jié)。

Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒細胞生物學研究有以下幾個方面。

細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調(diào)控。
⑤細胞分化及其調(diào)控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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