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細胞周期與凋亡檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品貨號:CS-C6048
  • 產(chǎn)品價格:電議
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地:進口、國產(chǎn)
  • 包裝類型:盒
  • 采購熱度:553
  • 庫存:100
  • CAS號:
  • 方法:
  • 含量:
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內(nèi)容:細胞周期與凋亡檢測試劑盒價格優(yōu)惠、質(zhì)量保證、歡迎咨詢訂購!

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中文名稱:細胞周期與凋亡檢測試劑盒
英文名稱:Cell Cycle and Apoptosis Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:50
發(fā)貨周期:1~3天
細胞周期與凋亡檢測試劑盒是一種采用經(jīng)典的碘化丙啶染色方法進行細胞周期與細胞凋亡分析的檢測試劑盒。本試劑盒每個樣品的細胞數(shù)量可以為10-100萬。
  碘化丙啶是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光,并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內(nèi)的DNA被碘化丙啶染色后,可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定,然后根據(jù)DNA含量的分布情況,可以進行細胞周期和細胞凋亡分析。碘化丙啶染色后,假設(shè)G0/G1期細胞的熒光強度為1,那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2,正在進行DNA復(fù)制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。凋亡細胞由于細胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化(DNA fragmentation)導(dǎo)致部分基因組DNA片斷在染色過程中丟失,因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染,即熒光強度小于1,在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰,即凋亡細胞峰。細胞發(fā)生凋亡時,由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂,產(chǎn)生凋亡小體,使細胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細胞凋亡的早期,細胞對前向角光散射的能力顯著降低,對側(cè)向光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期,前向和側(cè)向光散射的信號均降低。因此可通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化觀察細胞凋亡情況。
  本試劑盒通常應(yīng)用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測,則必須把組織消化成單細胞狀態(tài),才可以進行檢測。
注意事項
1、本試劑盒需使用流式細胞儀進行檢測。
2、需自備PBS、95%乙醇和RNase A。
3、熒光染料均存在淬滅問題,保存和使用過程中請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
4、PI對人體有刺激性,請注意適當防護。
5、請穿實驗服并戴一次性手套操作。
操作步驟
1、細胞樣品的準備:
a.對于貼壁細胞:小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細胞,至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,加入前面收集的細胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細胞,并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約1毫升冰浴預(yù)冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清。再次加入1ml冰浴預(yù)冷的PBS,重懸細胞。
b.對于懸浮細胞:1000×g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約1ml冰浴預(yù)冷的PBS,重懸細胞,并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的PBS,以避免吸走細胞。再次加入1ml冰浴預(yù)冷的PBS,重懸細胞。
2、細胞固定:
取4毫升冰浴預(yù)冷的95%乙醇,低速渦旋震蕩的同時加入1毫升細胞懸液,混勻后4℃固定2小時或更長時間。固定12-24小時可能效果更佳。1000×g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的乙醇,以避免吸走細胞。加入約5ml冰浴預(yù)冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的PBS,以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞,避免細胞成團。
3、PI染色液的配制:
4、染色:
每管細胞樣品中加入400μl PI染色液,緩慢并充分重懸細胞沉淀,37℃避光溫浴30分鐘。隨后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小時內(nèi)完成流式檢測,最好能在當日完成流式檢測。
5、流式檢測和分析:
用流式細胞儀在激發(fā)波長488 nm波長處檢測紅色熒光,同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。
儲存條件:-20℃,避光保存

細胞周期與凋亡檢測試劑盒細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面。
細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調(diào)控。
⑤細胞分化及其調(diào)控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。

原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司

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