產(chǎn)品目錄

本品是一種可以表達GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒，可以用于感染細胞或組織后進行細胞自噬(autophagy)的檢測。
LC3是酵母自噬關鍵蛋白ATG8在哺乳動物中的同源蛋白。LC3最初被分析鑒定為microtubule-associated protein 1 light chain 3 。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亞家族，其中對于LC3B的研究最為廣泛。到目前為止，LC3B被認為是細胞自噬信號通路最為關鍵的標志性蛋白。LC3B是一個具有125個氨基酸殘基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22個氨基酸蛋白，從而暴露出C端的甘氨酸，人們把它命名為胞質形式的LC3B I。在細胞自噬的過程中，其C端暴露的甘氨酸經(jīng)過一個類似泛素化的過程，以ATG7為E1樣激活酶，以ATG3為E2樣連接酶，以Atg12-Atg5-Atg16復合物為E3樣連接酶，在C端甘氨酸上共價連接上磷脂酰乙醇胺而成為LC3B-PE即LC3B II。與胞質定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬體的內膜和外膜上。在自噬體與溶酶體融合后，自噬體外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬體內膜上的LC3B II則被溶酶體內的蛋白酶所降解。盡管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其極強的疏水性，在SDS-PAGE電泳時，LC3B II比LC3B I遷移得更快，其表觀分子量分別為14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染細胞后，在非自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B以彌散的形式存在于細胞質中；而在自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B則聚集在自噬體膜上，以斑點的形式表現(xiàn)出來。
自噬是一種在進化上高度保守的通過溶酶體吞噬并降解部分自身組分的細胞內分解代謝途徑。自噬與多種生理功能有關，在饑餓等不利的環(huán)境條件下，細胞通過自噬降解多余或異常的細胞內組分，為細胞的生存提供能量及原材料，促進生物體的生長發(fā)育、細胞分化及對環(huán)境變化產(chǎn)生應答。自噬異常與多種病理過程如腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、代謝疾病、病原體感染等都有密切關系。由于細胞自噬在生理和病理過程中都有重要作用，自噬已經(jīng)成為細胞生物學領域的一個新的研究熱點。
Ad-GFP-LC3B是重組腺病毒，感染后能夠在靶細胞中有效表達綠色熒光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈現(xiàn)明亮的綠色熒光，可以用于細胞自噬的檢測。
腺病毒感染細胞后為瞬時表達，通常不會與基因組DNA重組，不能用于篩選穩(wěn)定細胞株。本產(chǎn)品感染體內外細胞后，有效表達時間通常不少于7天，不同細胞和組織的有效表達時間有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表達很可能會大大減弱。
Ad-GFP-LC3B采用了成熟的E1缺陷型重組腺病毒載體系統(tǒng)，感染普通的細胞后不能進行擴增和重組，從而可以有效降低本產(chǎn)品在活體生物中的風險。
本產(chǎn)品可以在表達E1的HEK293A、HEK293等適當細胞中擴增。
本產(chǎn)品的滴度≥1×108 pfu/ml，使用時可以按照108pfu/ml進行計算。如果按照20 MOI感染6孔板的細胞，每孔50萬細胞計算，共可以感染10個孔；如果按照20 MOI感染24孔板的細胞，每孔10萬細胞計算，共可以感染50個孔。如果MOI值提高，則相應可以感染的孔數(shù)會減少；如果MOI值降低，則相應可以感染的孔數(shù)會增加。
注意事項：
1. 反復凍融會降低病毒滴度，如有必要請在收到本產(chǎn)品后分裝保存。病毒融解后，如果在一周內使用，可以放置于4℃。如果-80℃保存時間超過一年，可能會導致滴度下降，此時建議重新測定病毒滴度。
2. 腺病毒感染需要細胞表面的CAR受體，請確認擬使用的細胞或組織可以被腺病毒感染。
3. 本產(chǎn)品使用前請仔細閱讀附錄1《腺病毒使用安全規(guī)范》。本產(chǎn)品生物安全等級為Biosafety Level 1 (BSL-1)，沒有確鑿證據(jù)顯示會導致健康成人產(chǎn)生疾病，可以按照常規(guī)的微生物實驗操作要求進行操作。
儲存條件：-20℃，有效期1～2個月。

Ad-GFP-LC3B細胞生物學研究有以下幾個方面。

細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調控。
⑤細胞分化及其調控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

在線咨詢

留言注意事項：

1.遵守中華人民共和國有關法律、法規(guī)，尊重網(wǎng)上道德，承擔一切因您的行為而直接或間接引起的法律責任。

2.請您真實的反映產(chǎn)品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產(chǎn)品有任何疑問,也可以留言咨詢。

3.未經(jīng)本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個人或團體的具有廣告性質的信息或類似言論。

您感興趣的產(chǎn)品*
您的單位*
聯(lián)系人*
聯(lián)系電話*
詳細地址*
常用郵箱*
請輸入您對我們的意見或建議*
驗證碼*