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細胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)的催化下加上生物素(Biotin)標記的dUTP(Biotin-dUTP)，隨后和辣根過氧化物酶(HRP)標記的Streptavidin(Streptavidin-HRP)結(jié)合，最后在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細胞，從而可以通過普通光學顯微鏡檢測到凋亡的細胞，這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理。

本試劑盒有如下優(yōu)點：

(1)高靈敏度：背景染色極低，陽性染色強，可以在單細胞水平檢測到細胞凋亡，同時由于凋亡早期就有DNA斷裂，可以檢測到早期的細胞凋亡。

(2)特異性好：TUNEL檢測時通常更容易標記凋亡細胞，而不容易標記壞死細胞。

(3)快速：僅需約2-3個小時即可完成。

(4)應用范圍廣：可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況，也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。

TUNEL法特異性檢測細胞凋亡時產(chǎn)生的DNA斷裂，但不會檢測出射線等誘導的DNA斷裂(和細胞凋亡時的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開，另一方面也不會把射線等誘導發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細胞判斷為凋亡細胞。

極少數(shù)細胞凋亡時沒有DNA斷裂，此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴格判斷細胞凋亡的情況下，最好同時檢測多個凋亡指標。

注意事項：

1.需自備用于洗滌細胞的PBS或HBSS，用于封片的抗熒光淬滅封片液(YT097)等適當?shù)姆馄?，用于固定?%多聚甲醛或向百奧萊博訂購免疫染色固定液(YT086)，同時需自備含0.1%Triton X-100的PBS或向百奧萊博訂購免疫染色洗滌液(YT089)。需自備過氧化氫，除石蠟切片外需自備甲醇。

2.如果用于石蠟切片的檢測，需自備蛋白酶K，二甲苯。

儲存條件：-20℃。

TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(顯色法)細胞生物學研究有以下幾個方面。

細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調(diào)控。
⑤細胞分化及其調(diào)控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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