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本試劑盒是目前最先進(jìn)的DNA Ladder抽提試劑盒之一。本試劑盒是針對(duì)細(xì)胞凋亡過(guò)程中產(chǎn)生的核小體間DNA鏈斷裂而設(shè)計(jì)的。可以非常有效地抽提最小片段為180-200bp的DNA ladder，同時(shí)又可以抽提到最大50kb左右的基因組DNA。本試劑盒可以抽提50個(gè)樣品。

DNA ladder也稱DNA fragmentation，是細(xì)胞凋亡的一個(gè)重要指標(biāo)。通常觀察到DNA ladder，就可以判定細(xì)胞發(fā)生了凋亡。

樣品首先被蛋白酶K消化，隨后加入適合DNA結(jié)合到純化柱上的緩沖液，然后加入到純化柱內(nèi)。通過(guò)高速離心，使DNA在穿過(guò)純化柱的瞬間，結(jié)合到純化柱上，隨后通過(guò)兩次洗滌去除各種雜質(zhì)，最后通過(guò)洗脫液把DNA洗脫下來(lái)。整個(gè)過(guò)程無(wú)需酚氯仿抽提，無(wú)需酒精沉淀，樣品裂解后僅需約15分鐘即可完成。

通過(guò)DNA純化柱方式抽提DNA ladder比用傳統(tǒng)的酚氯仿抽提酒精沉淀方法更加便捷，小片段DNA不容易損失。試劑盒提供了RNase A，可以獲得不含RNA的高純度總DNA，排除了RNA對(duì)DNA ladder觀察造成的干擾。

本試劑盒每次最多可以抽提20mg組織或200-350萬(wàn)個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞。樣品用量過(guò)多，反而會(huì)影響抽提效果。純化柱對(duì)于DNA的最大容量約為30微克。通常每200萬(wàn)Hela細(xì)胞或500萬(wàn)淋巴細(xì)胞可以抽提得到15-25微克總DNA，每25mg肝、腦、腎組織可以抽提得到10-30微克總DNA，每25毫克心、肺組織可以抽提得到5-10微克總DNA，每10mg脾組織可以抽提得到5-30微克總DNA。樣品的用量請(qǐng)勿超過(guò)純化柱的容量，樣品用量最好能保持在純化柱容量的70%或以下。當(dāng)然過(guò)少的樣品也不利于檢測(cè)到DNA ladder。

對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞的凋亡檢測(cè)，通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞就足夠用于DNA ladder的抽提和檢測(cè)。

試劑盒組份：

樣品裂解液A——————10ml

樣品裂解液B——————11ml

洗滌液I——————21ml(第一次使用前加入7ml無(wú)水乙醇)

洗滌液II——————16ml (第一次使用前加入24ml無(wú)水乙醇)

洗脫液——————22ml

蛋白酶K——————1.1ml

RNase A——————220μl

DNA純化柱及廢液收集管——————50套

注意事項(xiàng)：

1. 溫度較低時(shí)樣品裂解液A或樣品裂解液B中可能會(huì)有沉淀產(chǎn)生，屬正常現(xiàn)象。使用前必須檢查一遍。如有沉淀，55℃水浴孵育使沉淀溶解，混勻后使用。

2. 第一次使用前洗滌液I需添加7ml無(wú)水乙醇，洗滌液II需添加24ml無(wú)水乙醇，混勻，并在瓶上做好標(biāo)記。

3. 本試劑盒需使用55℃或70℃水浴，請(qǐng)?zhí)崆白骱脺?zhǔn)備。

4. 除特別說(shuō)明外，每次Vortex應(yīng)控制在5-10秒左右。

5. 本試劑盒所有操作均在室溫進(jìn)行，操作時(shí)無(wú)需冰浴。所有離心也均在室溫進(jìn)行。

6. 廢液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丟棄。

儲(chǔ)存條件：室溫，有效期一年。( 蛋白酶K需-20℃保存)

細(xì)胞凋亡DNA Ladder提取試劑盒(柱式吸附)細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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