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PCR-熒光探針法兩種計(jì)算方法

閱讀：1125     發(fā)布時(shí)間：2019/12/27 16:41:51

           PCR-熒光探針法基本原理：通過大量對(duì)比某一種細(xì)菌或病毒的基因，得到該細(xì)菌或病毒共同保守序列，根據(jù)該序列設(shè)計(jì)特異性引物，通過PCR擴(kuò)增，即可獲得相應(yīng)大小的片段，以此來檢測該細(xì)菌或者病毒的感染/污染狀態(tài)。
PCR-熒光探針法用RQ作統(tǒng)計(jì)量和△CT作統(tǒng)計(jì)量都是可以的，外文中使用這兩種方法的都不少。
       而且我實(shí)際計(jì)算過，實(shí)際上這兩種方法算出來的有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義應(yīng)該是相同的，但是注意P值會(huì)不同。
這其實(shí)問題不大，但是實(shí)際上，如果用△CT作統(tǒng)計(jì)量，基本很多時(shí)候它都是正態(tài)的，則需要使用參數(shù)檢驗(yàn)，并且標(biāo)準(zhǔn)差小，這樣有個(gè)好處就是如果是陰性結(jié)果的話，統(tǒng)計(jì)效能計(jì)算起來偏大。而如果用RQ作統(tǒng)計(jì)量，基本RQ大多都是非正態(tài)分布，并且標(biāo)準(zhǔn)差大，這樣如果陰性結(jié)果的話，統(tǒng)計(jì)效能值與△CT法比會(huì)偏小，這樣就很吃虧當(dāng)需要解釋統(tǒng)計(jì)效能時(shí)。
      PCR-熒光探針法其次，如果是用RQ值做統(tǒng)計(jì)量，則在一張圖中，無法同時(shí)顯示多個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量。除非比如說你的B基因的RQ值計(jì)算還是以某一樣本A基因作為Calibrator sample，雖然理論上用誰做統(tǒng)計(jì)結(jié)果都應(yīng)該一樣，但是說起來不好說，別人會(huì)問憑什么B基因用A基因的△CT值作歸一。而是用△CT法則不牽扯到這個(gè)問題，因?yàn)榇蠹叶际呛蛢?nèi)參減的，可以直接多組比較并且放在圖中。
      因此我的感覺，只要是△CT法肯定被認(rèn)可，則用△CT法是zui簡單且zui方便的方法。但是從本質(zhì)講RQ值法更本質(zhì)，因?yàn)椤鰿T只是用來比較的，而不能代替原來自身的表達(dá)量，而RQ是2-△△CT，這其實(shí)才反應(yīng)了樣本檢測基因的表達(dá)量，因?yàn)榇蠹叶?，CT值是與拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系。
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