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ELISA試劑盒的空白孔設(shè)置及注意事項(xiàng)

閱讀：4410     發(fā)布時(shí)間：2019/12/18 14:12:04

ELISA試劑盒的空白孔設(shè)置步驟如下：
 1. 空氣空白\水空白：一般是用于儀器調(diào)零的,所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值。
2.底物空白：一般是用于防止底物弱顯色所造成的讀數(shù)偏高，同樣所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值（只加底物和終止液）
3. 酶空白：一般在2步法實(shí)驗(yàn)中使用，主要是看酶是否和板有非特異性結(jié)合的，一般不做這個(gè) 。
ELISA試劑盒空白孔一般設(shè)一個(gè)，這是為了減除顯色液的OD值。而陰性和陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品最好是設(shè)2個(gè)復(fù)孔，雖然有點(diǎn)浪費(fèi)，但為了確保實(shí)驗(yàn)的可靠性，我認(rèn)為還是很有必要的。ELISA試劑盒空白孔加什么？一般兩個(gè)做法，看個(gè)人習(xí)慣或者說(shuō)看你們實(shí)驗(yàn)室的習(xí)慣：
1，什么都不加，然后那個(gè)孔按照操作流程來(lái)做，這個(gè)說(shuō)法的根據(jù)就是空白，也就是什么都沒有。
2，加樣本稀釋液，然后按照操作流程來(lái)做。這個(gè)做法的根據(jù)就是只要不含陽(yáng)性物質(zhì)就算是空白的，加入樣本稀釋液的目的是為了使這個(gè)孔除了在沒有陽(yáng)性物質(zhì)上其他的都與其他孔一致。
ELISA試劑盒注意事項(xiàng)：
  1、血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。
  2、 血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。如在冰箱中保存過(guò)久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。
  3、一般說(shuō)來(lái)，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過(guò)一周測(cè)定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾，澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無(wú)菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑。
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