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公司新聞

小鼠4-羥基壬烯酸HNE酶聯(lián)檢測試劑盒測定步驟

閱讀：646     發(fā)布時(shí)間：2020/9/10 16:21:12

      本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠4-羥基壬烯酸（4-HNE）水平。用純化的小鼠4-羥基壬烯酸（4-HNE）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入4-羥基壬烯酸（4-HNE），再與HRP標(biāo)記的4-羥基壬烯酸（4-HNE）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的4-羥基壬烯酸（4-HNE）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠4-羥基壬烯酸（4-HNE）濃度。 
小鼠4-羥基壬烯酸HNE酶聯(lián)檢測試劑盒測定步驟
1.加樣
 1. 除包被外都需45度加樣
 2.加樣體積要準(zhǔn)確
 3.管底加樣，不能加在管壁上
 4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴 
 1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
 2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
 3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
 4.加入底物后，反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，以便 不時(shí)觀察，待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí)，即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌 
 1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
 2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板 
 1.陰性對(duì)照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
 2.如用酶標(biāo)儀測定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
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