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細(xì)胞培養(yǎng)基方案詳解

閱讀：684     發(fā)布時(shí)間：2020/7/8 14:20:41

   在保持細(xì)胞完整性的同時(shí)快速從基質(zhì)中移除各種細(xì)胞系的一般程序。這個(gè)過程并不意味著對所有細(xì)胞系都適用。個(gè)別系統(tǒng)的最佳條件和濃度應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。傳代培養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期監(jiān)測細(xì)胞活力。細(xì)胞活力應(yīng)大于90%。
 

取出并丟棄廢細(xì)胞培養(yǎng)基。
 
用不含鈣和鎂的平衡鹽溶液清洗細(xì)胞，或用EDTA清洗。將洗滌液加入燒瓶與試管相對的一側(cè)。搖動(dòng)燒瓶1至2分鐘，沖洗細(xì)胞板，并丟棄洗滌液。
 
將2-3 ml/25 cm2的所選解離溶液添加到與細(xì)胞相對的燒瓶側(cè)。確保解離溶液覆蓋在細(xì)胞膜上。在37°C下培養(yǎng)燒瓶。輕輕搖動(dòng)燒瓶。一般情況下，細(xì)胞在5-15分鐘內(nèi)被解離，實(shí)際需要的時(shí)間會(huì)因細(xì)胞系的不同而有所不同。仔細(xì)監(jiān)控過程以避免細(xì)胞損傷。除了輕輕搖動(dòng)外，還可以敲打瓶狀細(xì)胞系，這些細(xì)胞系的特征是很難從基質(zhì)中移除，以加速去除。
 
當(dāng)電池完全分離后，將燒瓶豎直放置，使電池排至燒瓶底部。向燒瓶中加入完整的培養(yǎng)基。用移液管在單層膜表面反復(fù)分散細(xì)胞。計(jì)數(shù)細(xì)胞并傳代培養(yǎng)。
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