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技術(shù)服務(wù)

人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代

棄去培養(yǎng)上清，用pbs或生理鹽水清洗1-2次；

加入2ml0.25%胰酶t25瓶，使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

將細(xì)胞懸液1000rpm左右條件下離心4min，棄上清；

用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，t25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞復(fù)蘇：

將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

在1000rpm左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種

棄去培養(yǎng)上清，用pbs或生理鹽水清洗1-2次，加入1ml 0.25%胰蛋白酶t25瓶

1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

將細(xì)胞懸液1000rpm左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟：

1．用蓋片鑷將蓋，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板每孔一片或培養(yǎng)皿中每個平皿可放置2-3片；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% co2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司