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技術服務

熒光原位雜交技術洗滌

閱讀：77     發(fā)布時間：2024/10/22 13:28:46

熒光原位雜交技術洗滌：

1.松開蓋玻片，將制劑浸入加熱至73±1°C的洗滌溶液1（0.4x SSC/0.3%NP-40）中。在溶液中輕輕搖動帶有制劑的玻璃約3-5秒。培養(yǎng)1分鐘45秒。

2.轉(zhuǎn)移至洗滌溶液2（2x SSC/0.1%NP-40），再次搖動約3-5秒，并孵育30秒。

3.將玻璃邊緣貼在吸收墊上，輕輕擦干，在黑暗中自然晾干。

4.使用含有DAPI或DAPI防褪色的安裝介質(zhì)（對于尺寸最大為22×22 mm的玻璃蓋，使用10μl DAPI）。目的是以能夠使用熒光顯微鏡觀察細胞核的方式對細胞核進行染色。

5.用蓋玻片覆蓋，并用熒光顯微鏡檢查。

接下來，為了確保最佳的觀測效果，我們需仔細調(diào)整熒光顯微鏡的各項參數(shù)。首先，選擇合適的物鏡倍數(shù)，根據(jù)樣本的復雜度和所需觀察的詳細程度，通？蛇x用40倍或60倍油鏡以獲得更清晰的圖像。隨后，調(diào)整光源強度，既要保證熒光信號足夠明亮以進行準確分析，又要避免過強光線導致的熒光淬滅或樣本損傷。

在觀察過程中，利用顯微鏡的濾光片系統(tǒng)，選擇適合DAPI染色的激發(fā)光波長（通常為358nm）和發(fā)射光波長（通常為461nm），以凸顯細胞核的藍色熒光。此時，可以清晰地看到細胞核的形態(tài)、大小和分布，這對于研究細胞周期、染色體異常或核仁結(jié)構(gòu)等生物學問題至關重要。

若需進一步分析，可利用顯微鏡自帶的圖像捕捉軟件，拍攝并保存高質(zhì)量的熒光圖像。這些圖像不僅可用于當前研究的數(shù)據(jù)分析，也是未來學術交流與文獻發(fā)表的重要資料。

最后，完成觀察后，應小心移除蓋玻片，避免對樣本造成額外損傷。對于仍需保留的樣本，可重新置于適當?shù)谋４嬉褐，并標記好相關信息，以便后續(xù)研究或復查。整個熒光原位雜交技術的洗滌與觀察流程至此結(jié)束，但科學的探索永無止境，每一次實驗的結(jié)果都可能為我們揭示生命奧秘的新篇章。
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原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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