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加藥實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)CCK-8測(cè)定的影響

閱讀：83     發(fā)布時(shí)間：2024/10/6 13:24:57

加藥實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)CCK-8測(cè)定的影響：

（1）注意如果藥物具有還原性,會(huì)和CCK-8發(fā)生顯色反應(yīng),增加吸光度。

（2）藥物中的金屬對(duì)CCK-8顯色有影響:當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氧化鐵、硫酸銅會(huì)抑制5%,15%, 90%的顯色反應(yīng),使靈敏度降級(jí)。如果終濃度是10mM的話，將會(huì)100%抑制。

解決辦法

首先要確認(rèn)藥物是否有吸收,在含有藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8,測(cè)定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含藥物的培養(yǎng)基(加CCK-8)的吸光度高,則證明藥物有影響,可在加CCK-8之前更換培養(yǎng)基,去掉藥物的影響。

（3）由于培養(yǎng)基中可能含有氧化還原反應(yīng)的物質(zhì),在正式實(shí)驗(yàn)之前,建議使用一個(gè)孔作一下檢測(cè),有必要先確認(rèn)培養(yǎng)基和CCK-8是否反應(yīng)。一般正常的0D值應(yīng)該在0.4以下。

 空白對(duì)照

在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入CCK-8,培養(yǎng)一定的時(shí)間,測(cè)定450nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn)(細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn))時(shí),還應(yīng)考慮藥物的吸收,可在不含細(xì)胞,加入藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8,培養(yǎng)一定的時(shí)間,測(cè)定450nm的吸光度作為空白對(duì)照。

靈敏度影響

（1）對(duì)于不同的細(xì)胞，靈敏度不一樣，懸浮細(xì)胞較貼壁細(xì)胞難染色。

（2）對(duì)于貼壁細(xì)胞,一般加入CCK-8培養(yǎng)1-4小時(shí)吸光度已經(jīng)很高，但對(duì)于懸浮細(xì)胞則可能吸光度較低，可以通過(guò)延長(zhǎng)CCK-8的加入時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量來(lái)解決。

細(xì)胞黏附性

（1）以層粘連蛋白(Ln)包被96孔板,通過(guò)計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)孔板中貼壁細(xì)胞的數(shù)量反映細(xì)胞的黏附性。

（2）細(xì)胞的黏附性越強(qiáng),則單位時(shí)間內(nèi)貼于鋪有Ln板底的細(xì)胞數(shù)量越多，去除尚未貼壁的細(xì)胞后，應(yīng)用CCK-8等方法計(jì)量細(xì)胞數(shù)量便可間接反映不同細(xì)胞或不同處理的細(xì)胞黏附能力的差異。

藥物濃度檢測(cè)

將細(xì)胞培養(yǎng)后按照不同濃度的藥物處理-定時(shí)間后進(jìn)行CCK-8檢測(cè)，根據(jù)吸光度繪制曲線,計(jì)算該藥物抑制細(xì)胞數(shù)量一半時(shí)的濃度(IC50)。

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原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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