HEP-53.4 小鼠肝癌細(xì)胞注意事項(xiàng)

閱讀：25     發(fā)布時(shí)間：2024/8/21 11:50:00

注意事項(xiàng)

 

1. 常規(guī)消化收集細(xì)胞離心。

 

2. 離心后去掉離心管內(nèi)上清，加入1ml左右重懸細(xì)胞混勻，建議輕輕晃動(dòng)或者輕輕吹打細(xì)胞， 放入培養(yǎng)箱消化細(xì)胞，再消化1min左右。

 

3. 消化好后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散，迅速加入3-5ml含血清的培養(yǎng)基混勻以終止消化，離心去除

 

4. 加入5ml左右的細(xì)胞相應(yīng)的培養(yǎng)基混勻，按比例接入培養(yǎng)瓶/皿中。

 

5.顯微鏡下觀察看細(xì)胞是否成均勻分散的單細(xì)胞，若有少量成團(tuán)的小細(xì)胞團(tuán)可不用重新消化，使之貼壁后待細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后再消散細(xì)胞。

 

常溫發(fā)貨

 

收到后T25瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置2-3小時(shí)后觀察密度和狀態(tài)拍照2-3張反饋給銷售，密度達(dá)標(biāo)就可以傳代。前期傳代比例1:2，等再次長(zhǎng)滿后傳代時(shí)建議凍存其中一整瓶成1個(gè)1ml凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復(fù)凍存2-3只后才擴(kuò)增做實(shí)驗(yàn)，以防突發(fā)情況引起斷種。

 

干冰發(fā)貨常規(guī)細(xì)胞發(fā)貨凍存管2只，復(fù)蘇1只，另外一只備用，第一個(gè)復(fù)蘇不成功時(shí)嚴(yán)格按照廠家要求復(fù)蘇第二個(gè)，均沒有復(fù)蘇成功的情況即時(shí)留存復(fù)蘇照片通知我們。

 

貼壁細(xì)胞

 

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

 

2. 加入0.25％(w / v）0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化３.３.３.３.3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養(yǎng)皿中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

 

4. 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

 

５. 運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。

 

懸浮細(xì)胞

 

HEP-53.4 小鼠肝癌細(xì)胞懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞在HEP-53.4小鼠肝癌細(xì)胞懸浮狀態(tài)下的深入研究中，我們觀察到了一種前所未有的細(xì)胞適應(yīng)性與增殖特性。這些細(xì)胞在脫離傳統(tǒng)貼壁培養(yǎng)環(huán)境后，不僅未顯現(xiàn)出生長(zhǎng)抑制或凋亡的跡象，反而展現(xiàn)出了一種更為活躍的代謝狀態(tài)和增殖速率。通過高分辨率顯微鏡的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，我們可以清晰地看到細(xì)胞間的動(dòng)態(tài)交互變得更加頻繁，它們似乎在通過某種未知的機(jī)制交換著生長(zhǎng)信號(hào)與營養(yǎng)物質(zhì)，共同維持著懸浮體系中的生態(tài)平衡。

 

進(jìn)一步的分析揭示了懸浮狀態(tài)下細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的微妙變化。與貼壁時(shí)相比，這些細(xì)胞的微管與微絲網(wǎng)絡(luò)更加靈活多變，能夠迅速響應(yīng)外部環(huán)境的微擾，從而確保細(xì)胞在三維空間中的穩(wěn)定懸浮與高效遷移。這種結(jié)構(gòu)上的適應(yīng)性調(diào)整，很可能是細(xì)胞在懸浮條件下生存與繁衍的關(guān)鍵策略之一。

 

此外，我們還發(fā)現(xiàn)懸浮培養(yǎng)的HEP-53.4細(xì)胞在分泌因子譜上發(fā)生了顯著變化。一系列與細(xì)胞增殖、遷移及抗凋亡相關(guān)的蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)，這些變化不僅增強(qiáng)了細(xì)胞的生存能力，還可能促進(jìn)了腫瘤微環(huán)境的重塑，為細(xì)胞的進(jìn)一步擴(kuò)散與侵襲鋪平了道路。

 

為了驗(yàn)證這些發(fā)現(xiàn)的臨床意義，我們正著手構(gòu)建模擬體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)的體外培養(yǎng)模型，以更貼近生理?xiàng)l件地研究懸浮狀態(tài)下肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。同時(shí)，我們也在積極探索針對(duì)這一特殊生長(zhǎng)狀態(tài)的有效干預(yù)策略，旨在為肝癌的治療開辟新的途徑。未來的研究將聚焦于揭示懸浮細(xì)胞特有的信號(hào)通路與調(diào)控機(jī)制，以及這些機(jī)制如何影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與治療響應(yīng)，最終為改善患者預(yù)后提供科學(xué)依據(jù)。

​，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×10⁵~1×10⁶個(gè)/mL(不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同）可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:4的比例進(jìn)行。

 

運(yùn)輸形式低溫：1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

 

常溫: T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。