ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）作為一種高度特異且靈敏的生物分析技術(shù)，其間接法測(cè)抗體模式在生物醫(yī)學(xué)研究中占據(jù)舉足輕重的地位。這一模式巧妙運(yùn)用了抗原-抗體反應(yīng)的特異性以及酶促反應(yīng)的放大效應(yīng)，為檢測(cè)生物樣品中特定抗體提供了強(qiáng)有力的工具。
基本方法的操作如下:
1．將病原體的抗原在碳酸鹽緩沖液中4~C過(guò)夜包被，形成固相抗原，洗滌去除未與固相結(jié)合或結(jié)合不緊的抗原后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉，洗滌去除未結(jié)合的部分及雜質(zhì)。
2．加入含待測(cè)抗體的臨床樣本如血清等，溫育一定時(shí)間后洗板；此時(shí)，待測(cè)抗體就會(huì)與固陽(yáng)上特異抗原反應(yīng)而吸附于固相上。
3．加入酶標(biāo)記的抗人IgG抗體，溫育一定時(shí)間后洗板；此時(shí)，在固相上即形成固相抗原—待測(cè)抗體—酶標(biāo)二抗復(fù)合物。
4．加入酶底物，溫育顯色測(cè)定(圖2—6)。
間接法測(cè)抗體在目前應(yīng)用最多的是丙型肝炎病毒抗體(抗HCV)、人免疫缺陷病毒抗體(抗HIV)以及梅毒螺旋體抗體等的測(cè)定。從上述的測(cè)定模式可見(jiàn)，間接法測(cè)抗體，嚴(yán)格地講，所測(cè)定的僅為抗體的IgG類，不涉及IgM和IgA類，這是由酶標(biāo)二抗體所決定的。
影響間接法測(cè)定抗體的一個(gè)較大的因素是包被抗原的純度。現(xiàn)在間接法測(cè)抗體中所使用的抗原一般均為基因工程重組抗原，如HCV的3，4，5，HIV的gp41和gpl20和梅毒螺旋體Tl5，Tl7，T47等。基因工程抗原在純化時(shí)應(yīng)盡量去除用來(lái)表達(dá)的宿主如大腸桿菌的抗原，以免由于機(jī)體存在對(duì)這種宿主抗原的抗體而引起假陽(yáng)性反應(yīng)。此外，由于機(jī)體的IgG類抗體濃度較高，其中絕大部分為機(jī)體接觸外界環(huán)境刺激所產(chǎn)生的非特異IgG，因此，為避免這些高濃度非特異IgG對(duì)固相的吸附所致的假陽(yáng)性反應(yīng)，通常需對(duì)待測(cè)樣本做一定程度的稀釋。
在間接法ELISA中，首先，將待檢測(cè)的抗原固定于固相載體表面，形成一層均勻的抗原膜，宛如鋪設(shè)了一條通往特異性識(shí)別的橋梁。隨后，待測(cè)樣品中的抗體（目標(biāo)分子）如同敏銳的偵探，穿梭于樣品之中，一旦遇見(jiàn)其對(duì)應(yīng)的抗原，便迅速結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物，這一過(guò)程猶如鎖與鑰匙的完美契合，展現(xiàn)了生物分子間的高度專一性。
緊接著，引入一種酶標(biāo)二抗，它如同攜帶了信號(hào)放大器的偵探助手，能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合到已結(jié)合抗原的抗體上，形成更為復(fù)雜的夾心結(jié)構(gòu)。這一步驟不僅進(jìn)一步加固了抗原-抗體間的聯(lián)系，更為后續(xù)的酶促顯色反應(yīng)埋下了伏筆。
最終，在底物溶液的催化下，酶標(biāo)二抗上的酶發(fā)揮其催化作用，將無(wú)色的底物轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物，顏色深淺與待測(cè)抗體濃度成正比，宛如一幅生動(dòng)的畫卷，直觀地展示了抗體存在的痕跡與量級(jí)。這一過(guò)程，猶如化學(xué)魔法般，將微量的生物信息轉(zhuǎn)化為可量化的視覺(jué)信號(hào)，極大地提高了檢測(cè)的敏感性和準(zhǔn)確性。
綜上所述，ELISA間接法測(cè)抗體以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，在疾病診斷、疫苗效果評(píng)估、免疫學(xué)研究等領(lǐng)域發(fā)揮著不可替代的作用，是生物醫(yī)學(xué)研究中不可或缺的強(qiáng)大工具。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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