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技術(shù)服務(wù)

細(xì)胞核提取試劑盒

閱讀：201     發(fā)布時間：2024/5/30 11:33:28

    細(xì)胞核提取試劑盒用于從動物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。適合于動物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶，性能穩(wěn)定。
   
操作步驟：
1. 樣本處理
a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer，再加入50μL Reagent A，0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開的組織，可用雙層紗布過濾。
b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800 g 離心5~10 min收集細(xì)胞，計數(shù)。每次提取需要5 ×107個細(xì)胞，加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞，再加入50μL Reagent A，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨細(xì)胞20~30次。
2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中，4℃，700g 離心5 min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀。
3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700 g 離心5min。細(xì)胞核沉淀在管底。
4. 棄上清，在細(xì)胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉淀，1000g 離心10min ，棄上清，得到較純的細(xì)胞核沉淀。
5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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