免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）和免疫熒光（IF）實(shí)驗(yàn)方案是生物學(xué)研究中常用的兩種重要技術(shù)，它們?cè)诩?xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和病理學(xué)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。
免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）是一種通過特異性抗體與細(xì)胞內(nèi)的抗原結(jié)合，來揭示細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)和功能的實(shí)驗(yàn)方法。這種方法主要利用抗體的高度特異性和敏感性，結(jié)合化學(xué)標(biāo)記物，通過顯色反應(yīng)來定位抗原在細(xì)胞內(nèi)的位置。ICC實(shí)驗(yàn)方案通常包括細(xì)胞固定、抗原修復(fù)、抗體孵育、顯色反應(yīng)和觀察等步驟。通過精心設(shè)計(jì)和優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，研究人員可以準(zhǔn)確地了解抗原在細(xì)胞內(nèi)的分布和表達(dá)情況，從而揭示細(xì)胞的生命活動(dòng)規(guī)律和疾病發(fā)生機(jī)制。
免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）是實(shí)驗(yàn)方案則是一種利用熒光標(biāo)記物來檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)抗原分布的方法。與ICC相比，IF具有更高的靈敏度和分辨率，能夠在單個(gè)細(xì)胞水平上進(jìn)行精確的抗原定位。IF實(shí)驗(yàn)方案通常包括細(xì)胞固定、抗原修復(fù)、抗體孵育、熒光標(biāo)記和觀察等步驟。通過熒光顯微鏡的觀察，研究人員可以直觀地看到抗原在細(xì)胞內(nèi)的熒光信號(hào)，從而確定抗原的位置和分布。
一般流程
1. 用聚乙烯亞胺或多聚賴氨酸涂覆蓋玻片，在室溫下放置 1 小時(shí)。
2. 用無菌水充分漂洗蓋玻片 3 次，每次 1 小時(shí)。
3. 充分干燥蓋玻片，在紫外光下滅菌至少 4 小時(shí)。
4. 使細(xì)胞在玻璃蓋玻片上生長，或制備 Cytospin 或涂片制備物。
5. 用磷酸鹽緩沖液 (PBS) 簡單漂洗。
推薦使用 1 × PBS 0.1% Tween 20 作為洗滌緩沖液。
固定
可使用以下兩種方法中的一種固定細(xì)胞：
1. 室溫下，在 100% 甲醇（-20 ℃ 冷凍）中孵育細(xì)胞 5 分鐘。
2. 室溫下，在 4% 多聚甲醛（溶于 PBS 中，pH 7.4）中孵育細(xì)胞 10 分鐘。
用冰 PBS 洗滌細(xì)胞 3 次。
抗原修復(fù)（可選步驟）
在抗原修復(fù)緩沖液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行加熱處理后，有些抗體的效果會(huì)更好。查看產(chǎn)品信息，了解每種一抗的使用建議。
1. 將抗原修復(fù)緩沖液（100 mM Tris，5% [w/v] 尿素，pH 9.5）預(yù)熱至 95 ℃。具體方法為：將裝有緩沖液的蓋玻片染色缸置于水浴鍋中，水浴鍋的溫度設(shè)為 95 ℃。
2. 用小型寬頭鑷子小心將蓋玻片置于蓋玻片染色缸內(nèi)的抗原修復(fù)緩沖液中，記下長有細(xì)胞的蓋玻片面。
3. 在 95 ℃ 下加熱蓋玻片 10 分鐘。
4. 從抗原修復(fù)緩沖液中取出蓋玻片，浸入 6 孔組織培養(yǎng)板內(nèi)的 PBS 溶液中，保持長有細(xì)胞的一面朝上。
5. 用 PBS 洗滌細(xì)胞 3 次，每次 5 分鐘。
總之，
免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）是和免疫熒光實(shí)驗(yàn)方案是生物學(xué)研究中不可或缺的重要工具。它們的應(yīng)用不僅有助于深入了解細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能，還為疾病診斷和治療提供了有力的支持。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，這些實(shí)驗(yàn)方案將在生物學(xué)研究中發(fā)揮更加重要的作用。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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