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技術(shù)服務(wù)

10種病原體PCR檢測(cè)試劑盒PCR實(shí)驗(yàn)步驟

閱讀：408     發(fā)布時(shí)間：2023/4/24 14:42:19

10種病原體PCR檢測(cè)試劑盒PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
 嗜水氣單胞菌
 肺炎鏈球菌
 產(chǎn)氣腸桿菌
 肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種
 奇異變形桿菌
 化膿性鏈球菌
 陰溝腸桿菌陰溝亞種
 嗜熱脂肪地芽孢桿菌
 嗜熱鏈球菌
 費(fèi)氏志賀氏菌（福氏志賀氏菌)
 Hyphomonas adhaerens
 脫硫弧菌脫硫亞種（脫硫微螺菌、脫硫螺菌、脫硫桿菌、脫硫芽孢弧菌、脫硫弧菌）
 厭氧消化鏈球菌
 銅綠假單胞菌(綠膿桿菌)
 纖維纖維微菌
 長(zhǎng)野解普魯蘭桿菌
 變異鏈球菌
 人蒼白桿菌
 戊糖乳桿菌
 菊糖芽孢乳桿菌
 豇豆慢生根瘤菌
 長(zhǎng)雙歧桿菌
 鰒發(fā)光桿菌
 斯氏梭菌
 嗜鹽四聯(lián)球菌
 海蘇特氏菌
 耐久腸球菌(堅(jiān)韌鏈球菌)
 海氏腸球菌
 盲腸腸球菌
 伴放線放線桿菌
 類干酪乳桿菌類干酪亞種
 嗜肺軍團(tuán)菌
 谷氨酸棒狀桿菌（黃色短桿菌）
 發(fā)酵纖維單胞菌
 長(zhǎng)赤細(xì)菌
 海洋鹽單胞菌
 Georgenia muralis
 河流弧菌
 

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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