• 13585831301
  • 021-59541103 021-60443211
  • 3004967995

聯(lián)系我們

聯(lián)系人: 021-59541103 021-60443211

電話:021-59541103 021-60443211

手機(jī):13585831301

E-mail：3004967995@qq.com

詳細(xì)地址： 上海嘉定區(qū)嘉羅公路1661

技術(shù)服務(wù)

大鼠食管組織提取物操作流程

閱讀：467     發(fā)布時(shí)間：2022/11/24 15:55:27

大鼠食管組織提取物操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。
雞血清白蛋白 (抗原) Albumin From Chicken Serum (≥95%, SDS... 10MG 免疫球蛋白
人纖維蛋白原 (抗原) Fibrinogen From Human Plasma (≥95%, S... 10MG 免疫球蛋白
牛IgG IgG From Bovine Serum (≥95%, SDS-PAGE) 10MG 免疫球蛋白
雞IgG IgG From Chicken Serum (≥95%, SDS-PAGE) 10MG 免疫球蛋白
狗IgG IgG From Dog Serum (≥95%, SDS-PAGE) 10MG 免疫球蛋白
山羊IgG IgG From Goat Serum (≥95%, SDS-PAGE) 10MG 免疫球蛋白
豚鼠IgG IgG From Guinea Pig Serum (≥95%, SDS-... 10MG 免疫球蛋白
馬IgG IgG From Horse Serum (≥95%, SDS-PAGE) 10MG 免疫球蛋白
人IgG IgG From Human Serum (≥95%, SDS-PAGE) 10MG 免疫球蛋白
小鼠IgG IgG From Mouse Serum (≥95%, SDS-PAGE) 10MG 免疫球蛋白
豬IgG IgG From Porcine Serum (≥95%, SDS-PAGE) 10MG 免疫球蛋白
兔IgG IgG From Rabbit Serum (≥95%, SDS-PAGE) 10MG 免疫球蛋白
大鼠IgG IgG From Rat Serum (≥95%, SDS-PAGE) 10MG 免疫球蛋白
人IgM (抗原) IgM From Human Serum (~90%, Liquid) 10MG 免疫球蛋白
兔抗親和素 (抗血清) Anti-Avidin antibody produced in rabbit 1ML 免疫血清
兔抗生物素 (抗血清) Anti-Avidin antibody produced in rabbit 1ML 免疫血清
羊抗牛IgG (抗血清) Anti-Bovine IgG antibody produced in g... 1ML 免疫血清
兔抗牛IgG (抗血清) Anti-Bovine IgG antibody produced in r... 1ML 免疫血清
兔抗BSA (抗血清) Anti-BSA antibody produced in rabbit 1ML 免疫血清
羊抗雞IgG (抗血清) Anti-Chicken IgG antibody produced in ... 1ML 免疫血清
兔抗雞IgG (抗血清) Anti-Chicken IgG antibody produced in ... 1ML 免疫血清
兔抗地高辛 (抗血清) Anti-Digoxin antibody produced in rabbit 1ML 免疫血清
羊抗狗IgG (抗血清) Anti-Dog IgG antibody produced in goat 1ML 免疫血清
兔抗狗IgG (抗血清) Anti-Dog IgG antibody produced in rabbit 1ML 免疫血清
 

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

品牌中心更多>