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小鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘糖蛋白抗體（OMgp-Ab）檢測(cè)ELISA試劑盒使用方法

閱讀：403     發(fā)布時(shí)間：2022/8/4 14:46:32

 小鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘糖蛋白抗體（OMgp-Ab）檢測(cè)ELISA試劑盒使用方法:
測(cè)定法的靈敏度來自作為報(bào)告的酶。眾所周知,酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml     3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml     2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml   1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X)2ml
SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X)15ml
SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(1X)10ml
SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(2X)5ml
SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(6X)2ml
非變性PAGE蛋白上樣緩沖液(5X)2ml
非變性非還原性蛋白上樣緩沖液(5X)2ml
考馬斯亮藍(lán)快速染色液250ml
考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒(常規(guī)法)1盒
考馬斯亮藍(lán)染色液(常規(guī)法)250ml
考馬斯亮藍(lán)染色脫色液(常規(guī)法)500ml
快速銀染試劑盒25次
30% Acr-Bis (29:1)100ml
40% Acr-Bis (39:1)100ml
Ammonium persulfate (APS)10g
Coomassie brilliant blue G2505g
Coomassie brilliant blue R2505g
0.5M DTT2ml
0.5M DTT10ml
SDS80g
SDS80g
10% SDS100ml
TEMED10ml
1M Tris-HCl,pH6.8100ml
1M Tris-HCl,pH8.8100ml
1.5M Tris-HCl,pH8.8100ml
蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)200微升
 

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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