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抗人BCS1-like小鼠雜交瘤細胞；1C3C12A2胞培養(yǎng)步驟

閱讀：389     發(fā)布時間：2022/5/26 16:02:39

抗人BCS1-like小鼠雜交瘤細胞；1C3C12A2胞培養(yǎng)步驟：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法三：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
1）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。棄培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入到凍存液中。
Skirrow瓊脂
改良CCD瓊脂基礎(chǔ)
Bolton肉湯基礎(chǔ)
哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基
Skirrow瓊脂配套試劑
改良CCD瓊脂配套試劑
Bolton肉湯配套試劑
水解酪蛋白胨（MH）瓊脂
布氏肉湯
Skirrow瓊脂
改良CCD瓊脂基礎(chǔ)
Bolton肉湯基礎(chǔ)
哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基
高氏合成1號瓊脂培養(yǎng)基
血平板 (成品培養(yǎng)基)
哥倫比亞血平板(成品培養(yǎng)基)
改良克氏雙糖培養(yǎng)基
硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基
半固體瓊脂
3%氯化鈉三糖鐵瓊脂
血瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)
苯丙氨酸培養(yǎng)基
 

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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