1.配制65mM H2O2基液:本試劑盒提供的H2O2基液中的H2O2濃度約為1M。由于過 氧化氫不是非常穩(wěn)定,使用前需自行測定過氧化氫的實際濃度。把濃度約為1M的H2O2基液用本試劑盒提供的CAT Assay buffer稀釋100倍,使H2O2基液中的H2O2濃度約為10mM。
2.準備樣品:
a,細胞或組織樣品:取恰當細胞或組織進行裂解,可以采用Leagene Western及IP細胞裂解液,如果有必要需進行適當勻漿,低速離心取上清,-70℃凍存,用于CAT的檢測。
b,血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備,用生理鹽水10倍稀釋后, 可以直接用于本試劑盒的測定,尿液通常也可以直接用于測定,-70℃凍存,用于CAT的檢測。
c,全血樣品:收集適量的全血(whole blood)至一抗凝管內(nèi),顛倒混勻。取100μl全 血凍融一次,用CAT Assay buffer1000倍后進行CAT檢測。
d,血液中的紅細胞裂解液:用抗凝管收集血液,顛倒混勻。取至少500μl全血4℃3000g離心5min,棄上清,沉淀用預冷的生理鹽水洗滌3次。
e,高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀釋。
f,(選做)樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,以便于后續(xù) 計算單位蛋白重量組織或細胞內(nèi)的CAT含量。
3、CAT檢測:按照下表設置空白管、自身對照管、測定管,溶液應按照順序依次加入,并 注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高,可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測能設置平行孔。
4、分光光度計檢測405nm處吸光度,分光光度計比色杯光徑0.5cm。如果沒有分光光度計,亦可用酶標儀檢測,但如果有條件,盡量采用分光光度計檢測。蒸餾水調(diào)零,讀取各管吸光度值。一般應數(shù)小時內(nèi)檢測完畢。
Aquaporin 2水通道蛋白-2抗體
AGT血管緊張素原抗體
Androgen receptor雄激素受體抗體
AVEN細胞死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制劑)
Axin1軸蛋白1抗體
ATG9B自噬相關蛋白9B抗體
Apg12自噬相關蛋白12抗體
ATG13自噬相關蛋白13抗體
ATG3自噬相關蛋白3抗體
ADAMTS4整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶4型抗體
phospho-ATF2 (Ser490/498)磷酸化活化復制因子2抗體
phospho-Amyloid Precursor Protein (Tyr757)磷酸化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體
ACTR絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶ATR抗體
ADAM18去整合素樣金屬蛋白酶18抗體
ATF6活化轉錄因子6抗體
AP2 beta銜接蛋白β抗體
Gamma-Adaptin銜接蛋白γ/γ-Adaptin抗體
AQP9水通道蛋白-9抗體
Annexin A3膜粘連蛋白A3抗體
Annexin IV膜粘連蛋白 A4抗體
APG8A自噬相關蛋白8A抗體
phospho-Akt (Thr450)磷酸化蛋白激酶B抗體
phospho-AMPK alpha-1 (Thr198)磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體
phospho-Akt(Thr308)磷酸化蛋白激酶B抗體
APOBEC3G脫氧胞苷脫氨酶蛋白抗體