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磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1抗體的生物素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)

閱讀：527     發(fā)布時(shí)間：2021/6/22 15:49:34

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1抗體的生物素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：
1.如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會(huì)抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對(duì) 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析；
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會(huì)有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個(gè)不同的分子比來(lái)篩選最適條件；
3.用NHSB量過(guò)量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活；
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時(shí)可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等；
5.當(dāng)游離ε-氨基(賴(lài)氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時(shí),或位于酶的催化位點(diǎn)時(shí),生物素化會(huì)降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性；
6.生物素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價(jià)結(jié)合；
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會(huì)對(duì)生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)作用；
8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對(duì)某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。
腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體
蛋白激酶B2
血管生成素2抗體
芳香化酶/細(xì)胞色素P450/雌激素合成酶抗體
腺苷A2A受體抗體
蛋白激酶A錨定蛋白95抗體
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去整合素樣金屬蛋白酶8抗體
芳香乙酰胺脫乙?；笜拥鞍?抗體
ACN9蛋白抗體
雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（N端）
腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體
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α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1
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肌動(dòng)蛋白α/α-SMA/α Actin抗體
ATP結(jié)合蛋白家族7抗體
ASCL2蛋白抗體
磷酸化脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體
磷酸化活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體
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活化轉(zhuǎn)錄因子5抗體
活化轉(zhuǎn)錄因子6β抗體
 

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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