1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
實驗通用規(guī)則:
1、洗液不夠時,可用蒸水自行配制PH7.4,0.02M的酸愛中液,加入0,1%的吐溫
20作為洗液。加入1/1000的출氮鋼后可長期保存
2.液全部完后,可將璃示版在桌子上平行経動30,混勻液に、也可以用時示的是
3、底物有一定的毒性,終止液對反膚有蝕性,應(yīng)盡量造免接駛。
4、盈測前,要打開酶示儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上:
5、吸取液依時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
8、洗板時,每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使青洗更加底。沒有洗板機時,制去液體后,要將奪標(biāo)板在振或毛紙上用力治干
9、用槍吸取液時速度不能太俠,以兔產(chǎn)生氣泡而使吸取를不住確
10、底物是光感的,要在臨用前現(xiàn)
試劑使用須知:
(1)請參照相關(guān)法規(guī)、文獻、MSDS等信息,理解并掌握好試劑的特性,再進行安全操作。
(2)通常購買試劑時一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話,更加注意其他保管和管理。
(3)萬一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員。必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進行操作。對于使用后的廢棄物,不要或者舊的試劑,應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理。
(4)購買后,請務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項;做好預(yù)防顛倒,摔壞的措施和管理體制;在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項,做好必要的安全對策;對沒有標(biāo)明其危害特性、有害特性的,也要慎重地進行操作;必須帶好防護用具,小心翼翼進行操作。
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