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唾液乳酸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒試劑準(zhǔn)備步驟

閱讀：580     發(fā)布時(shí)間：2021/3/17 14:46:01

唾液乳酸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒試劑準(zhǔn)備步驟：
 
1. DNA模板
 
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
 
3．10×PCR Buffer
 
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
 
5．Taq酶操作步驟 
 
1．唾液乳酸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
 
      10×PCR buffer             5μl
 
      dNTP mixl                 4μl
 
       引物1（10pM）               2μl
 
       引物2（10PM）              2μl
 
       Taq酶（2U/μl）            1μl
 
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
 
      加ddH2O至               50 μl
 
    視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
 
2．唾液乳酸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
 
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
 
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
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原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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