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鴨子磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（pAMPK）ELISA試劑盒操作步驟

閱讀：414     發(fā)布時間：2021/3/4 15:07:55

鴨子磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（pAMPK）ELISA試劑盒操作步驟：
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
試劑使用須知：
（1）請參照相關(guān)法規(guī)、文獻、MSDS等信息，理解并掌握好試劑的特性，再進行安全操作。
（2）通常購買試劑時一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話，更加注意其他保管和管理。
（3）萬一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員。必須在專業(yè)人士的指導監(jiān)督下進行操作。對于使用后的廢棄物，不要或者舊的試劑，應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當處理。
（4）購買后，請務(wù)必確認標簽上的注意事項；做好預防顛倒，摔壞的措施和管理體制；在使用前再次確認標簽上的注意事項，做好必要的安全對策；對沒有標明其危害特性、有害特性的，也要慎重地進行操作；必須帶好防護用具，小心翼翼進行操作。
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原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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