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ELISA試劑盒在實驗中經(jīng)常會動到哪些常見問題

閱讀：1337     發(fā)布時間：2019/1/14 13:45:36

ELISA試劑盒在實驗中經(jīng)常會動到哪些常見問題1. ELISA實驗反應(yīng)時間不同是由什么決定的？答：抗原與抗體、抗體與酶標(biāo)抗體反應(yīng)一般在37℃ 2h～3h達(dá)到高峰。時間太短,敏感性下降,時間太長,吸附的抗原或復(fù)合物(在這個溫度下)可能脫落。酶底物反應(yīng)時間的確定：一般采用15min～30min～45min。也可以標(biāo)準(zhǔn)陽性血清為準(zhǔn),隨時測定其OD值,當(dāng)達(dá)到規(guī)定的OD值時,即終止反應(yīng)。2. 稀釋的抗體如何保持其穩(wěn)定性？3. 如何客服批間差異較大的缺陷？4. 顯色體系的穩(wěn)定性如何保持？5. 在試劑盒的研發(fā)過程中什么最重要？是抗體嗎？（一） 顯色淡，靈敏度偏低可能原因及解決方法？我們在做實驗時，常會遇到elisa試劑盒顯色淡靈敏度偏低的問題，以下是根據(jù)不同問題可能原因及其防止方法總結(jié)，僅供參考：可能原因及防止方法：1．孵育反應(yīng)時間不足定時鐘準(zhǔn)確定時 2．洗滌時沖擊力太大，洗滌液浸泡時間太長，洗滌次數(shù)增加減少洗滌沖擊力，按說明書要求保留洗滌時間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)3．顯色劑滴加量不足或順序顛倒，或混合后加入滴加顯色液時，滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，反加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入4．顯色劑反應(yīng)時間不足準(zhǔn)確定時5．蒸餾水水質(zhì)有問題測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響6．試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高試劑盒置保溫箱內(nèi)運輸，并放足夠數(shù)量的冰塊，盡量縮短運輸時間7．試劑、樣品用前未能平衡用前試劑、樣品置室溫平衡 30分鐘左右。8．樣品和NaN 3 防腐，抑制了酶的反應(yīng)樣品不能加 NaN 3 防腐9．試劑盒超過有效期超過效期試劑盒不要使用10．試劑開啟時間過長長菌試劑開啟后請盡量在短時間內(nèi)用完11．移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸頭內(nèi)壁掛液太多或內(nèi)壁不清潔校正移液器，吸頭要配套，每次裝吸頭要吻合緊密。移液不宜過快，排放應(yīng)完全。吸頭內(nèi)壁要清潔，最好一次性使用。12．恒溫箱溫度不足37℃或水浴鍋水溫度不足37℃）放入反應(yīng)板時注意培養(yǎng)箱溫度，及時調(diào)整，孵育反應(yīng)期間開啟不宜太多，影響溫度平衡。（二） 背景深，全部都有色可能原因及解決方法？1. 洗滌不充分，洗后為拍干，樣品中有其他成分殘留或酶標(biāo)記物殘留濃縮洗液準(zhǔn)確配置；10倍濃縮洗滌液如有結(jié)晶則應(yīng)讓結(jié)晶于室溫全部溶解后再量取稀釋;充分洗滌，徹底拍干，加樣或者加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染。2. 樣品污染。樣本應(yīng)新鮮采集或低溫保存，防止污染。3. 培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時間過長調(diào)整培養(yǎng)箱溫度，準(zhǔn)確定時。4. 吸嘴重復(fù)使用，為洗凈或消毒不徹底吸嘴盡可能一次性使用5. 蒸餾水污染使用新鮮的蒸餾水6. 酶等試劑混用。不同批號試劑勿混用。7. 一次實驗的樣本量過多，加樣時間太長，導(dǎo)致實際反應(yīng)時間延長。合理安排實驗，避免幾塊酶標(biāo)板同時加樣。（三） 重復(fù)性不佳可能原因及解決方法？1. 樣品數(shù)量多少不一，加樣時間有長有短。重復(fù)某一樣品時，加樣時間盡可能與第一次接近。2. 保溫時間不一致，洗滌條件不一致，操作人員不一致。重復(fù)測定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性。3. 加樣量不一致。樣本稀釋前應(yīng)充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴。。（四） 出現(xiàn)白板，陽性對照不顯色可能原因及解決方法？1. 顯色液變質(zhì)更換新的顯色液2. 洗滌液配置有誤請按說明書所示稀釋倍數(shù)配制。3. 未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入注意不要漏加4. 終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂妹看渭右呵靶杩辞鍢?biāo)簽。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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