牛細(xì)小病毒（BPV）核酸檢測試劑盒實驗要點

閱讀：652     發(fā)布時間：2021/1/7 15:25:08

1．CTAB 溶液在低于15℃時會析出沉淀，因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預(yù)熱。  

2．在最適條件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纖維狀，很容易一下子就從溶液中鉤出。不過，某些植物種的DNA 沉淀中可能含有雜質(zhì)，特別是多糖，使DNA 沉淀呈絮狀或膠狀，這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。 

3．飽和酚雖然可有效地使蛋白質(zhì)變性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和氯仿的混合液，可減輕這兩種現(xiàn)象，同時可加入適量的異戊醇（苯酚—氯仿—異戊醇=25:24:1），異戊醇的作用是消泡，并使蛋白質(zhì)層緊密，使水相和有機(jī)相分層較好。 細(xì)菌的培養(yǎng)和收集 將含有質(zhì)粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24 小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12 小時至對數(shù)生長后期。小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA 十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速，能同時處理大量試樣,所得DNA 有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。