HCT116/L-OHP人結(jié)腸癌耐奧沙利鉑細(xì)胞細(xì)胞傳代步驟

閱讀：524     發(fā)布時(shí)間：2020/12/9 16:17:45

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂高子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2カ2mi化液(0.25% Trypsin-0.53 MM EDTA)于培養(yǎng)飛中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然言在売微境下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下高心4分鐘,棄去上請(qǐng)液,補(bǔ)加1-2mL培并液后吹勻。

4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8m培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。細(xì)胞復(fù)蘇步張:將含有1mL胞液的凍存管在37て水浴中迅速鬼解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在

條件下離心4分鐘清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8m培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞空度。細(xì)胞六存步待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例;1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗麗底1-2次后加入1ml酶,細(xì)胞變園脫落后,加入2m完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。2.1000RPM高心5分鐘去揮上清。用血清重暴浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存普細(xì)數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞六存3.將東存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮情存。記錄六存管位置以便下次拿取。

運(yùn)輔和保存視天氣狀泥和運(yùn)距高遠(yuǎn)近,公司與客戶(hù)協(xié)商后遠(yuǎn)擇下述方式中的一種進(jìn)行

1)1mL凍存細(xì)液裝于1.ml的凍存管中,置了続滿(mǎn)干水的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn);收到胞后青盡快解六復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇提作,凍存細(xì)胞可在80℃的條件下保存1個(gè)月。

2)T-25培瓶充滿(mǎn)完全培養(yǎng)基后進(jìn)行第溫運(yùn);收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶本超過(guò)85%青立印進(jìn)行傳代提作,如慧浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼。