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腦視網(wǎng)膜血管瘤G7蛋白抗體 常用免疫組織化學方法的原理
閱讀:651 發(fā)布時間:2020/7/30 15:40:29
腦視網(wǎng)膜血管瘤G7蛋白抗體常用免疫組織化學方法的原理:
1. 免疫熒光細胞化學技術(shù):將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量。
2. 免疫酶細胞化學技術(shù):是目前免疫組織化學研究中最常用的技術(shù).
腦視網(wǎng)膜血管瘤G7蛋白抗體基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進行定位或定性研究。
3. 免疫膠體金技術(shù):就是用膠體金標記一抗,二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針對組織或細胞內(nèi)的抗原進行定性,定位或定量研究.由于膠體金的電子密度高,多用于免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究。
高度的特異性,免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質(zhì)提取出來,以此作為抗原或半抗原,通過免疫動物后獲得特異性的抗體,再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的,
腦視網(wǎng)膜血管瘤G7蛋白抗體因此還必須借助于組織化學的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來,以其達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性,定位或定量的研究。
1. 每個樣品取2支流式檢測管,分別注明同型對照和待測,兩管分別加入106-7/100μl個待側(cè)細胞(若細胞濃度低或加入的細胞懸液較多,可1200轉(zhuǎn)/每分鐘,10分鐘低溫離心,棄上清,保證100μl被檢樣品)
2. 同型對照管中加入熒光標記同型對照抗體,做陰性對照;待測管中加入熒光標記的一抗,做為實驗管,各加3μl (按抗體使用說明書,一抗可做選擇幾個梯度1:20、50、100倍稀釋)混勻即可。
3. 上機檢測,先做同型對照,調(diào)整電壓至陰性區(qū)范圍,再測實驗管即可。